复合微生物制剂发酵液态饲料对育肥猪生长性能、肉质、免疫力、抗氧化能力和肠道形态结构的影响

摘要：本试验旨在研究复合微生物制剂发酵液态饲料对育肥猪生长性能、肉质、免疫力、抗氧化能力和肠道形态结构的影响。选取平均体重为(25.28±2.35)kg的60日龄“杜×长×大”三元杂交猪120头，按公母各1/2、体重相近原则随机分为4组，每组3个重复，每个重复10头猪。对照组饲喂固态的基础饲粮，试验1组饲喂液态饲料(按照水料比为2.5：1的比例将固态的基础饲粮制备成液态饲料)，试验2、3组则分别饲喂经1%和2%复合微生物制剂(植物乳杆菌+粪肠球菌混合增殖发酵液)发酵(25℃下发酵12h)制备的发酵液态饲料。预试期5d，正试期60d。试验期间统计试验猪各生长性能数据；在试验结束时采集试验猪血液检测免疫和抗氧化指标，采集胸肌、腿肌测定肉质成分，采集各肠道组织评估肠道形态结构。结果显示：1)各组之间平均日采食量(ADFI)差异不显著(P>0.05)；与对照组相比，试验1、2、3组的终末体重和平均日增重(ADG)显著提高(P<0.05)，料重比(F/G)显著降低(P<0.05)，试验3组的ADG比对照组高出86.34g/d；此外，试验2、3组的ADG显著高于试验1组(P<0.05)。2)与对照组相比，试验1、2、3组血清中免疫球蛋白G(IgG)和免疫球蛋白A(IgA)含量显著提高(P<0.05)；试验3组血清中IgG含量显著高于试验1、2组(P<0.05)，试验2、3组血清中IgA含量显著高于试验1组(P<0.05)；与对照组相比，试验1、2、3组血清中过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和总抗氧化能力(T-AOC)显著提高(P<0.05)；此外，试验3组血清中SOD活性和T-AOC显著高于试验1、2组(P<0.05)，CAT活性显著高于试验1组(P<0.05)。3)与对照组相比，饲喂1%和2%复合微生物制剂发酵液态饲料显著提高了十二指肠、回肠、结肠的绒毛高度和绒毛高度/隐窝深度比值(P<0.05)，饲喂2%复合微生物制剂发酵液态饲料还显著提高了空肠和盲肠的绒毛高度/隐窝深度比值(P<0.05)。4)与对照组相比，饲喂1%和2%复合微生物制剂发酵液态饲料均显著提高了猪肉中缬氨酸、赖氨酸、谷氨酸、亚油酸、维生素E和维生素B1的含量(P<0.05)，其中试验3组猪肉中谷氨酸和亚油酸含量分别高达1.82和1.85g/100g，是对照组的2倍多，并显著高于试验2组(P<0.05)。综上可知，饲喂2%复合微生物制剂发酵液态饲料可改善育肥猪的肠道形态结构，增强机体免疫力和抗氧化能力，提高育肥猪的生长性能，并可改善肉质。

关键词：植物乳杆菌；粪肠球菌；液态饲料；育肥猪；免疫指标；抗氧化指标；肉质

微生物发酵液态饲料是指将微生物添加至一定水料比的液态饲料中，经一定条件发酵后制备的液态生物饲料。在19世纪末的英国，有部分生猪养殖公司用生猪屠宰后的下脚料和肉屑作为液态饲料原料进行粗放式液态饲料发酵。至21世纪，世界各国已陆续开始使用液态饲料。近些年，随着微生物在饲料工业的中应用，发酵液态饲料在生猪养殖中的应用日益得到重视。越来越多的研究认为液态饲料经微生物发酵可产生更多的有机酸和释放更多小分子物质，对维护畜禽胃肠道微生态平衡和提升饲料转化率、增强机体免疫力效果明显。此外，发酵后产生的代谢物具有多种生物学活性，如抗菌、抗氧化、降解霉菌毒素和分解抗营养因子等。最近几年，畜牧业生产中因抗生素过量使用带来的危害日益突出，国际粮食危机引起的饲料原料价格上涨使生猪养殖成本急剧增加，影响了畜牧业的健康发展。为减少抗生素使用，提升饲料的转化效率，降低生猪养殖成本，保证畜牧业健康和稳定的发展，有必要深入研究微生物发酵液态饲料对生猪的影响。已有研究报道，断奶仔猪因胃酸较缺乏，导致对有害菌入侵防御较弱，最终导致仔猪腹泻率高，成活率低，养殖的经济效益较差。而给仔猪饲喂发酵液态饲料可明显降低仔猪胃肠道的pH，防止大肠杆菌和沙门氏菌等病原体的增殖；同时，发酵液态饲料能促进饲粮酸化，显著提高饲粮酸度(大约降低2个pH)，从而抑制饲粮中病原菌增殖，大幅度降低饲粮有害菌隐性感染率，有较好的杀菌抑菌作用。此外，发酵液态饲料可明显提高猪的消化率、改善猪胃肠道形态、降低饲料中各种抗营养因子的含量以及减少舍内灰尘。有报道显示，给断奶仔猪饲喂发酵液态饲料可促进仔猪的小肠绒毛生长，增加日增重和饲料转化率。近几年，陆续有研究证实饲喂发酵液态饲料可提高乳猪、断奶仔猪和生长肥育猪的生长性能。猪的育肥阶段是饲料消耗和转化率逐渐上升的阶段，也是实现经济效益最为关键的一段，该阶段胃肠道的健康状态影响育肥猪后半程的生长发育。本试验以60日龄的育肥猪为研究对象，以有益菌植物乳杆菌和粪肠球菌制备发酵液态饲料，评估复合微生物制剂发酵液态饲料降本增效的可能性，以期为微生物发酵液态饲料在生猪养殖中的应用奠定基础，从而推动微生物发酵液态饲料在生猪养殖中的应用。

1 材料与方法

1.1 试验设计

选取120头初始体重为(25.28±2.35)kg的60 日龄“杜×长×大”三元健康育肥猪，按公母各占1/2、体重相近原则随机分为4组，每组3个重复，每个重复10头。对照组饲喂固态的基础饲粮，试验1组饲喂液态饲料，试验2、3组则分别饲喂经1%和2%的复合微生物制剂发酵制备的发酵液态饲料。预试期5d，正试期60 d。基础饲粮是参照NRC(2012)25～50kg育肥猪营养需求配制的全价配合饲料，其组成及营养水平见表1。饲粮干物质、粗蛋白质、钙和总磷含量的测定分别参照国标GB/T 6438-2007、GB/T 6432--2018、GB/T 6436-2018 和GB/T 6437-2018。液态饲料和发酵液态饲料的制备方法如下：首先按照水料比为2.5：1的比例将固态的基础饲粮制备成液态饲料，然后分别在液体饲料中添加1%和2%的复合微生物制剂[植物乳杆菌(1.13×108 CFU/mL)+粪肠球菌(1.21×108CFU/mL)混合增殖发酵液]，在室温(25℃)下发酵12h制成发酵液态饲料。试验所用植物乳杆菌和粪肠球菌由福建省农业科学院畜牧兽医研究所提供，并参照该实验室拟定的培养条件进行增殖。

1.2 饲养管理

所有试验猪饲养于同一栋猪舍，中间采用1.5m高的砖墙分隔，免疫、驱虫、保健和消毒按猪场常规程序进行。所有试验猪均按液态饲料的饲喂模式(管道式)进行分餐饲喂，每天4餐，饮水采用猪用自动饮水碗。

1.3 样品采集

1.3.1 血液

试验结束当天早上，每组每个重复随机选取10头试验猪，由前腔静脉采集血液10mL，室温静置30min 后3000r/min离心20min，取上清，-20℃保存备用。

1.3.2 肠道和肌肉组织

试验结束当日上午，每个重复随机选取3头试验猪，麻醉后处死。采集1cm左右的完整的十二指肠、空肠、回肠、结肠和盲肠肠段，加入10%多聚甲醛固定，然后石蜡包埋，制成组织切片备用；取胸肌和腿肌各100g，-4℃保存备用。

表1 基础饲粮组成及营养水平(风干基础)

1)预混料为每千克饲粮提供：VA 10 000 IU，VB623 mg，VB12 0.23 mg，VD3 2500 IU， VE 15.5 IU，VK3 1.35mg，生物素0.63 mg，叶酸15.0mg，D-泛酸8.5 mg，烟酸300mg，抗氧化剂0.28 mg，胆碱600 mg， NaCl 4 g，CaHPO4 5 g，CaCO3 12 g，Cu 15 mg，Fe 130mg，Mn 13.43 mg，Zn 52.4 mg， I 0.40 mg， Se 0.09 mg，赖氨酸10 g，蛋氨酸 5 g。

2)消化能为计算值，其余为实测值。

1.4 指标测定及方法

1.4.1 生长性能测定

在正试期第1天和第60天上午，空腹进行称重并记录其初始体重和终末体重。试验期间记录采食量，并计算平均日采食量(ADFI)、平均日增重(ADG)和料重比(F/G)。计算公式如下：

ADG(g/d)=1000×(终末体重-初始体重)/试验天数；

ADFI(g/d)=总采食量/试验天数；

F/G=ADFI/ADG。

1.4.2 血清免疫和抗氧化指标测定

血清免疫指标[免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白A(IgA)含量]和抗氧化指标[丙二醛(MDA)含量、总抗氧化能力(T-AOC)及超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性]均采用试剂盒测定，其中免疫指标测定所用试剂盒购自厦门致善生物科技股份有限公司，抗氧化指标测定所用试剂盒购自上海厦维生物技术有限公司，严格按照试剂盒操作说明书进行测定。

1.4.3 肉质成分测定

取-4℃保存的胸肌和腿肌进行肉质成分分析，具体检测成分及检测方法见表2。

表2 肉质成分测定参考方法

1.4.4 肠道组织形态观察

将之前制备的各肠道组织石蜡切片依次加二甲苯碘、二甲苯、无水乙醇碘进行脱蜡，再进行苏木精-伊红(HE)染色、脱水和树胶封片，然后电子显微镜观察肠道组织形态，并进行图像采集分析。

1.5 统计分析

试验数据采用SAS9.0软件进行单因素方差分析，并采用Duncan氏法进行组间多重比较，试验结果用平均值±标准误表示，P>0.05表示差异不显著，P<0.05表示差异显著。

2 结果与分析

2.1 复合微生物制剂发酵液态饲料对育肥猪生长性能的影响

由表3可知，与对照组相比，饲喂液态饲料的试验1组和饲喂发酵液态饲料的试验2、3组的ADFI无显著变化(P>0.05)，但终末体重和ADG显著提高(P<0.05)，F/G显著降低(P<0.05)，尤其是饲喂2%复合微生物制剂发酵液态饲料的试验3组，其ADG比对照组高出86.34g/d。此外，饲喂1%和2%复合微生物制剂发酵液态饲料的试验2、3组之间ADG和F/G差异不显著(P>0.05)，但这2组的ADG均显著高于饲喂未经复合微生物制剂发酵的液态饲料的试验1组(P<0.05)。

表3 复合微生物制剂发酵液态饲料对育肥猪生长性能的影响

同行数据肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05)，相同或无字母表示差异不显著(P>0.05)。下表同。

2.2 复合微生物制剂发酵液态饲料对育肥猪血清免疫和抗氧化指标的影响

由表 4可知，与对照组相比，饲喂液态饲料或发酵液态饲料均显著提高了育肥猪血清中IgG和IgA含量(P<0.05)。与饲喂未经复合微生物制剂发酵的液态饲料相比，饲喂2%复合微生物制剂发酵液态饲料显著提高了育肥猪血清中IgG含量(P<0.05)，饲喂1%和2%复合微生物制剂发酵液态饲料显著提高了育肥猪血清中IgA含量(P<0.05)。此外，试验3组血清中IgG含量还显著高于试验2组(P<0.05)。4组育肥猪血清中IgM含量没有显著差异(P>0.05)。与对照组相比，饲喂液态饲料或发酵液态饲料均显著提高了育肥猪血清中CAT、SOD活性和T-AOC(P<0.05)。3个试验组中，以饲喂2%复合微生物制剂发酵液态饲料的试验3组血清中CAT、SOD活性和T-AOC最高，其SOD活性和T-AOC显著高于试验1、2组(P<0.05)，CAT活性显著高于试验1组(P<0.05)。血清中MDA含量和GSH-Px活性4组之间无显著差异(P>0.05)。

表4 复合微生物制剂发酵液态饲料对育肥猪血清免疫和抗氧化指标的影响

2.3 复合微生物制剂发酵液态饲料对育肥猪肠道形态结构的影响

由表5可知，与对照组相比，饲喂发酵液态饲料均显著提高了育肥猪十二指肠、回肠、结肠和盲肠的绒毛高度(P<0.05)，且以饲喂2%复合微生物制剂发酵液态饲料时效果最好，而隐窝深度只有盲肠有显著增加(P<0.05)；而饲喂液态饲料不仅显著提高了育肥猪十二指肠、回肠和盲肠的绒毛高度(P<0.05)，并显著增加了回肠、结肠和盲肠的隐窝深度(P<0.05)。与对照组相比，饲喂1%和2%复合微生物制剂发酵液态饲料显著提高了育肥猪十二指肠、回肠、结肠的绒毛高度/隐窝深度比值(P<0.05)，饲喂2%复合微生物制剂发酵液态饲料还显著提高了空肠和盲肠的绒毛高度/隐窝深度比值(P<0.05)。此外，与饲喂未经复合微生物制剂发酵的液态饲料相比，饲喂2%复合微生物制剂发酵液态饲料显著提高了育肥猪十二指肠、空肠、回肠、结肠和盲肠的绒毛高度和绒毛高度/隐窝深度比值(P<0.05)。

表5 复合微生物制剂发酵液态饲料对育肥猪肠道形态结构的影响

2.4 复合微生物制剂发酵液态饲料对育肥猪肉质成分的影响

由表6可知，与对照组相比，饲喂1%和2%复合微生物制剂发酵液态饲料均显著提高了育肥猪肉中缬氨酸、赖氨酸、谷氨酸、亚油酸、维生素E和维生素B、的含量(P<0.05)，其中饲喂2%复合微生物制剂发酵液态饲料的试验3组育肥猪的肉中谷氨酸和亚油酸含量分别高达1.82和1.85 g/100 g，是对照组的2倍多，并显著高于饲喂1%复合微生物制剂发酵液态饲料的试验2组(P<0.05)；饲喂发酵液态饲料也显著提高了育肥猪肉中谷氨酸、亚油酸、维生素E和维生素B的含量(P<0.05)。育肥猪肉中苏氨酸、丙氨酸、锌、铁、二十碳四烯酸、亚麻酸、烟酸、维生素C和维生素 B，的含量4组之间差异不显著(P>0.05)。

表6 复合微生物制剂发酵液态饲料对育肥猪肉质成分的影响

3 讨论

3.1 复合微生物制剂发酵液态饲料对育肥猪生长性能的影响

发酵液态饲料作为一种新型生物饲料，能提高猪的ADG，降低F/G，进而提高养殖经济效益。之前有研究报道给断奶仔猪分别饲喂干饲料、液态饲料或发酵液态饲料，结果发现，饲喂发酵液态饲料的仔猪比饲喂干饲料的仔猪体重增加22.3%，饲料转化效率提高10.9%。本研究的结果也证实，饲喂液态饲料或复合微生物制剂发酵液态饲料均可提高育肥猪的终末体重和ADG，且以饲喂复合微生物制剂发酵液态饲料效果更好。此外，有研究发现，将饲粮发酵72h(30～35℃)可明显提高生长肥育猪对饲粮中粗蛋白质、粗纤维和中性洗涤纤维的回肠消化率以及粗蛋白质的胃肠道消化率。饲喂发酵液态饲料的猪蛋白质消化率提高原因可能与胃液pH的降低有关，低pH会刺激胃中蛋白质水解并减慢胃排空速度，从而让采食的蛋白质饲料在胃中有更多时间进行消化。本研究中，饲喂发酵液态饲料的育肥猪的F/G显著降低，主要可能是复合微生物制剂在发酵过程中产生了大量的代谢物质如氨基酸、维生素、活性肽、消化酶、有机酸等，这些物质能够促进肠道对营养成分的消化吸收，提高饲料的转化效率，最终体现为降低F/G，增加养殖经济效益。此外，本次试验中发酵饲料的水料比例是2.5：1，这与常规液态饲料是一致，但是否存在因水料比不一致而影响饲料的发酵或最终影响生长性能的情况，以及性别对试验结果的影响等都有待下一步深入研究。

3.2 复合微生物制剂发酵液态饲料对育肥猪免疫力和抗氧化能力的影响

血液免疫指标可实时反映仔猪免疫状态。机体的免疫包括细胞免疫和体液免疫，其中IgG在体液免疫反应中起重要作用，控制体内细菌感染，而IgA是仅次IgG的黏膜免疫抗体，是机体黏膜免疫的关键，它主要是由胃肠道黏膜上皮产生，在关键时候可以结合多种病原来控制腹泻感染研究报道，给猪饲喂发酵饲料，其血液中IgG和IgM含量显著升高。有研究发现，饲喂仔猪发酵饲料后，其血清IgG含量降低，血清IgA和IgM含量无显著变化。本研究结果发现，饲喂液态发酵饲料的育肥猪，其血清中IgG和IgA的含量显著增加，尤其以IgA含量增加的最为明显，而血清中IgM含量则无显著的变化。已有研究表明，脂肪酸包括单不饱和脂肪酸(MUFA)、多不饱和脂肪酸(PUFA)和饱和脂肪酸(SFA)不仅有改善肉质的作用，还对机体的激素代谢和多种酶的活性具有调节作用，在调节脂质代谢、预防心脑血管疾病、延缓免疫功能下降等方面发挥着广泛的作用。本研究中饲喂液态发酵饲料的育肥猪血清中IgG和IgA含量增加可能与复合微生物制剂发酵后产生了大量的脂肪酸密切相关。

自由基在生物领域常作为一种衰老和疾病的代名词，受人诟病。作为机体清除自由基的能力的指征，T-AOC常作为机体健康评价的指标之一。GSH-Px、SOD和CAT是机体最主要的酶促抗氧化系统，其主要作用是清除机体产生的过多的自由基和活性氧，防止脂质过氧化物产生。本研究发现，饲喂复合微生物制剂发酵液态饲料显著提高了育肥猪血清的T-AOC，这可能是复合微生物制剂在发酵过程中产生了维生素、氨基酸以及多酚类等多种抗氧化活性物质，进而提高了机体的抗氧化能力。

3.3 复合微生物制剂发酵液态饲料对育肥猪肠道形态结构的影响

小肠绒毛是猪体内生长最快的组织，其生长所需的多种养分直接从肠道吸收而得。有研究报道，饲喂发酵液态饲料的猪具有明显较长的绒毛和较高的绒毛高度/隐窝深度比值。研究发现，中复合微生物制剂发酵液态饲料解决了固态饲料因适口性差出现小肠短时间“饥饿”状态而引起的肠绒毛发育问题，能为育肥猪提供适宜的养分，维持了肠绒毛的生长，进而增强了小肠对养分的吸收。

3.4 复合微生物制剂发酵液态饲料对育肥猪肉质成分的影响

猪肉中的氨基酸谱对于肉质评估很重要。猪肉中氨基酸的种类、含量和比例与肉品质和风味有关。例如，必需氨基酸(EAA)决定了肌肉蛋白质质量的好坏，而呈味氨基酸，如丙氨酸、甘氨酸、谷氨酸、天冬氨酸和丝氨酸，可能会影响猪肉的风味。在本研究中，饲喂复合微生物制剂发酵液态饲料的猪肉中有较高的赖氨酸和谷氨酸含量，该结果表明饲喂复合微生物制剂发酵液态饲料可以改善猪肉的品质并增强风味。因为赖氨酸不仅是人体内的一种EAA，而且是改善肉制品质地和色泽、提高产品良率的重要物质，而谷氨酸是最重要的呈味氨基酸之一，它是主要的风味物质，在肉品新鲜度和缓冲咸味和酸味中发挥作用。之前提到复合微生物制剂发酵饲料后可产生的大量的脂肪酸，这些脂肪酸与猪肉的营养价值以及构成肉类特征风味的直接相关。因此，饲喂复合微生物制剂发酵液态饲料改善猪肉脂肪酸组成的机制可能是因为经复合微生物制剂发酵后液态饲料中的脂肪酸组成得到改善。

4 结论

综上可知，饲喂复合微生物制剂发酵液态饲料可增加育肥猪肠道绒毛高度和部分肠段绒毛高度/隐窝深度比值，提高机体抗氧化能力和免疫力，进而提高生长性能，同时还能改善和提升育肥猪肉的品质和风味。

参考文献：略。

作者：陈碧红 发表于《动物营养学报》2023年第12期。